作者：曹国文,曾代勤,戴荣国,姜永康,陈春林,周淑兰,翟少钦,刘宗惠,钟正泽,欧秀群,江 山

摘 要: 本试验比较了不同工艺制备的*添加剂即常规散剂、水煮提取制剂和醇水提取制剂对猪生长性能等影响,结果三种制剂对猪的生产性能、肠道益生菌指数和对猪外周血液t细胞比值与猪瘟抗体滴度均有不同程度的提高,其中醇水提取物制剂能显著提高猪的日增重、饲料报酬、肠道益生菌乳酸杆菌和双歧杆菌指数以及t细胞比值,并能提高猪瘟疫苗后的抗体合格率。常规散剂次之,水煮提取制剂较差。

关键词: *添加剂;不同工艺;生物活性

*作为猪的饲料添加剂,不仅能提高生产性能,降低饲养成本,而且具有增强、抗应激和保健等多种功能,且不存在和环保问题,因而受到国内外同行的广泛重视。但就我国目前研究状况来看,由于对*饲料添加剂的开发用资金投入少、研究不深入、工艺水平落后、技术水平低等,大多仍然停留在传统的配方、配伍、制成粉(散)剂的粗制阶段,很少有将其有效成分提取浓缩后制成精专型或复合产品,这不利于现代工厂化生产、药效评价和产品质量标准的制定与产品质量控制,亦不利于产品的广泛推广和应用。本试验为筛选产业化生产工艺而设计,为此,我们对经饲喂试验优选出来的*添加剂组方进行了不同工艺制备试验,以确定适宜的生产工艺,为*提取物制剂产业化奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 设备与仪器 fc-160全不锈钢高效万能粉碎机

(湖南衡阳市制药设备厂生产);ctg-10*多功能提取罐(湖南衡阳市机械厂生产);mdrp-5喷雾干燥器(无锡市现代喷雾干燥设备有限公司生产);cs101电热干燥箱(重庆银河试验仪器有限公司制造);全自动生化测定仪ag(美国landmarkscientific公司生产);紫外分光光度计u2vikon923(瑞士bio-tekkontron公司生产)。

1.1.2 主要试剂 95%乙醇、肠道菌培养基、戊二醛、甲基绿及常用化学试剂等(购自重庆市医药公司化学试剂部);壳聚糖絮凝剂(上海伟康生物制品有限公司出品);猪瘟正向血凝试剂(中国农科院兰州兽医研究所提供)。

1.1.3 中药组方的确定 根据配方筛选试验结果,结合来源的广泛性和尽量不与人争药源的原则,本试验选择杜仲叶、女贞子、山楂等多种中药组成。杜仲叶、女贞子收自荣昌农村,其余购自荣昌县长寿中药行,经鉴定均为地道中药材。

1.2 试验方法

1.2.1 *添加剂制备与添加量

1.2.1.1 常规散剂的制备 将中药饮片置60e烘干,粉碎,过80目筛,按比例混合即成,按3%的比例加入饲料中。

1.2.1.2 水煎煮法提取物的制备 复方中药饮片,加水(10倍,2、3次6倍)煎煮3次,每次1h,过滤,合并滤液,滤液加热浓缩至1b1~1b2时,在60~80e下按10%加入絮凝剂,搅拌5min,置室温过夜,过滤,滤液浓缩至稠膏状,加入少量载体混合,于60e烘干,粉碎,过80目筛,分装备用。用时按1%(相当于生药3g)加入饲料中。

1.2.1.3 醇-水提取物的制备 复方中药饮片粉碎成粗粉,加5倍70%乙醇浸泡2h后回流提取1h,滤出乙醇液,回收乙醇,过滤,弃沉淀备用。药渣加水(8倍),于80e温浸2次,合并浸出液,过滤,减压浓缩至1b1~1b2时,在60~80e下按10%加入絮凝剂,搅拌5min,置室温过夜,过滤,滤液与乙醇提取液合并,再减压浓缩至稠膏状,加入少量载体混合,于60e烘干,粉碎,过80目筛,分装即成。用时按0.5%(相当于生药115g)加入饲料中。

1.2.2 不同*制剂对猪生产性能影响的测定

1.2.2.1 试验设计与饲粮,同文献[1]。

1.2.2.2 试验动物与饲养管理 本试验在重庆市养猪科学研究院猪场进行,在荣昌县农村选约10kg断奶日龄相近的健康长白@荣昌杂交仔猪,每组8头,4个重复。经驱虫与接种后进行正式试验。试验期间,自由采食,自由饮水。每天清扫圈舍1次,定期进行。全期试验120d。

1.2.2.3 测定指标及方法 主要测定平均日增重和料重比。试验猪于试验结束时的早上8b00后空腹称重计算全期平均日增重和料耗情况,然后计算料重比。

1.2.3 不同*制剂对猪肠道菌群影响的测定 试验35d时,采集直肠粪便,按文献[2]进行主要肠道菌系大肠杆菌、肠球菌、乳酸杆菌和双歧杆菌的测定。

1.2.4 不同*制剂对猪细胞和体液影响的测定

1.2.4.1 猪外周血t细胞的测定,参照文献介绍的方法[3]进行。

1.2.4.2 猪瘟抗体的测定,参照使用说明书进行。

2 试验结果

2.1 生产性能测定结果

不同剂型(常规散剂、水煎提取物、醇-水提取物)*添加剂对育肥猪的生产性能影响,试验结果见表1。表1结果表明,所筛选出*添加剂的不同剂型(常规散剂、水煎提取物和醇水提取制剂)均能提高猪的生产性能,日增重分别比对照组提高8121%3114%和9145%,比*对照组分别提高5143%、0150%和6164%。醇水制剂与对照组比较有显著性差异(p<0105)。饲料报酬分别比对照组提高7195%、6153%和10123%,比*组分别提高7143%、6100%和9171%。

2.2 肠道菌群测定结果

试验35d后,三个中药添加剂组和对照组猪肠道菌群中主要菌系大肠杆菌、肠球菌、乳酸杆菌和双歧杆菌的变化,结果见表2。

从表2可以看出,中药常规散剂组、水煮提取组和醇水提取组粪便中的大肠杆菌与肠球菌数均低于对照组,尤其是中药常规散剂组

与对照组相比具有显著性差异(p<0.05)。

中药各组粪便中的乳酸杆菌和双歧杆菌数均明显高于对照组,其中常规散剂、醇水提取组的乳酸菌比对照组显著提高

(p<0.05)。中药各组的双歧杆菌与对照组相比均呈显著性差异(p<0.05)。

2.3 细胞和体液测定结果

2.3.1 t细胞测定结果(%) 中药各组与*和空白对照组t细胞检测结果为常规散剂:43.69±2.53;水提取物:42.04±3.70;醇水制剂:48.94±2.85;*组:43.44±2.79;对照组:38.40±2.44。试验结果表明,*添加剂和*组与空白对照组相比,*添加剂和*均有提高t细胞的百分比的趋势,经spss分析软件分析处理,醇水提取物组与水提取物组、土霉素组和粉剂组与对照组相比差异显著(p<0.05),而醇水提取物组与对照组相比差异极显著(p<0.01),其余处理组间无显著性差异。表明*添加剂与适量*(土霉素)可以提高猪的细胞功能,尤以醇水工艺制备的*添加剂效果明显。

2.3.2 猪瘟抗体测定 接种猪瘟兔化弱毒疫苗35d后采血,分离血清以正向血凝试验测定猪瘟抗体,抗体滴度达1b16或以上为合格。结果抗体合格率分别为常规散剂75.0%;水提取物62.5%;醇水制剂87.5%;*组62.5%;对照组50.0%。中药散剂、水煮提取物、醇水提取物和*各组的猪瘟抗体合格率均高于对照组。尤以醇水制剂组较高。

3 讨论与结论

3.1 不同工艺制备*添加剂对育肥猪生产性能影响试验结果表明,我们研制的*常规散剂、水煎提取物和醇水提取制剂均能提高猪的生产性能,但仅醇水制剂与对照组比较有显著性差异(p<0.05)。饲料报酬亦分别比常规散剂和水提取物有较大提高(2.1%~3.5%)。从生产性能看,醇水提取制剂明显优于常规散剂和水煮提取制剂,这可能是因为醇水分步提取,能*大限度提取其有效成分(尤其是黄酮类化合物),加之温度不超过80e,减少了活性的损失,从而产生良好的促生长性能。水煮提取物的促生长效果明显差于另外两组,可能是有效成分提取不全和长时间煮沸的持续高温造成部分活性丧失的缘故。

3.2 不同工艺制备*添加剂对断奶猪肠道菌群的影响从研究结果可以看出,我们研制的*添加剂(常规散剂或提取物制剂)对猪肠道中大肠杆菌和肠球菌均有一定的抑制作用,尤其是常规散剂组与对照组相比具有显著性差异(p<0.05),而提取物制剂各组相对低于常规散剂组,这可能是由于提取过程中损失了部分活性成分(挥发性部分)所致。但中药各组均能促进肠道内有益菌如乳酸杆菌、双歧杆菌的增殖,其中常规散剂和醇水提取组的乳酸菌比对照组显著提高(p<0.05)。中药各组的双歧杆菌与对照组相比均呈显著性差异(p<0.05)。大量研究证实,乳酸菌和双歧杆菌的生理功能与动物机体的生命活动息息相关。这

些益生菌在胃肠道增殖后,能大量合成维生素,增加营养,辅助食物消化,促进宿主代谢,抑制蛋白质腐败、有助于恢复和保持正常胃肠道功能,增加胃肠蠕动,促进消化和吸收,提高增重和降低料耗,增加经济效益。*添加剂其有效成分主要为有机酸(绿原酸、齐墩果酸、山楂酸)、多糖和黄酮类等,这些化合物可能通过对肠道中益生菌的增殖,从而实现对动物机体力的增强和生产性能的提高。

3.3 不同工艺制备*添加剂对猪细胞和体液的影响

本试验用酯酶染色法测定了试验各组外周血液中t细胞百分率,用猪瘟正向血凝试验测定了试验各组接种猪瘟疫苗的抗体升长情况。结果表明,3%粉剂能显著的提高猪只t细胞百分率,醇水提取物能极显著的提高t细胞百分率,说明该添加剂能增强细胞功能。不同工艺制剂其增强效果不一,醇水提取物组(低浓度组)明显优于其它工艺和浓度组。猪瘟抗体合格率测定结果证实,中药散剂、水煮提取物和醇水提取制剂各组均有提高猪瘟抗体合格率与增强体液功能,且以醇水制剂组较好。

本试验结果证明,不同工艺制备的*添加剂,其生物活性有异。常规散剂用量大,吸收利用不完全,质量难于控制;水煮提取物从促生长性能、对肠道有益菌的作用以及对细胞和体液的影响来看,虽有作用,但均不如常规散剂和醇水提取制剂;醇水制剂无论是在促进猪只生长和肠道有益菌的增殖,还是提高猪外周血t细胞比值和猪瘟抗体合格率方面则明显优于常规散剂和水煮提取物,且用量小,质量易控,适宜推广。

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