中华绒螯蟹(eriocheirsinensis)俗称河蟹在动物分类学上属甲壳纲,十足目,方蟹科,绒螯蟹属。河蟹生长快,肉质细嫩,味道鲜美,具有较高的经济价值。中华绒螯蟹、龄性腺未成熟幼蟹每公斤约100~200只,形似纽扣大小,俗称扣蟹当前,我国扣蟹基本上采用常规方法养殖,养殖过程中常出现不恰当使用*和重金属,造成致病菌的抗药性增强,从而导致蟹体力下降。

目前虽宣传使用无公害养殖技术标准,但该技术标准对蟹病的防治还是有选择地采用,所以商品蟹仍会出现药残和重金属含量超标情况。国外水产养殖已经进入有机养殖时代,在养殖过程中执行有机养殖标准,绝不使用农药、*等化学物质国内有些地区在养殖鱼、虾方面进行了一些尝试但尚未有有机养殖河蟹试验报道。为达到增强河蟹机能、提高河蟹抗病力的目的,研究河蟹的机制,开展刺激剂的研究和开发,是执行有机水产养殖标准的有效手段之一。

现有的研究表明,甲壳动物和其它无脊椎动物一样,缺乏脊椎动物所具有的特异性功能,其反应依赖于非特异性机制。国内外有关蟹类研究的报道不多,但有关甲壳类动物的研究报道却较多,如对鲎(limulus)机能,国外就有诸多研究。鲎的体内有一个非常有效的非特异性系统,包括细胞防御因子和体液防御因子,这些非特异性的防御因子协同血细胞,能对致病菌等异物进行凝集、凝固、黑化、溶菌、、吞噬等反应[1~6]。

中药的防病保健作用是明显的,原因是中药材质中含有增强功能的成分,能有效地调节动物体内非特异性抗病毒因子。例如,大蒜中的sod及还原性硫化物具有氧自由基,阻止生命氧化的作用;黄芪含有多糖、甙、黄酮和微量元素等多种成分,对系统、*系统等具有广泛的影响,是一种促进剂;枸杞子含有大量枸杞多糖及具有抗氧化作用的微量元素等[7,8]。有关资料表明,近200种*具有促进作用[9,10]。本研究按照有机水产品养殖标准要求,根据中药药理筛选出4种中药进行配伍,作为扣蟹组织中的溶菌酶(lysozyme,ul)活力、超氧化物歧(superoxidedismutase,sod)活性,以此来探讨中药添加剂与扣蟹非特异性力的关系,为河蟹有机养殖模式的建立提供理论支持,同时为甲壳动物的有机水产养殖、营养学积累资料。

1 试验材料

1.1 试验动物

以中华绒螯蟹大眼幼体至幼蟹(扣蟹)为试验对象,大眼幼体购自赣榆县金兴育苗场,每公斤18万尾。

1.2 试验设置

试验池宽8m,长50m,池埂2m(上按有机方式种植庄稼)。试验池设有机养殖试验池4组,常规养殖池1组。有机养殖与常规养殖用一个宽8m的曝气池相互隔离,互不影响。养殖用水为井水,经检测符合5渔业水质标准(gb11607-89);养殖池底质中药残、农残和重金属含量经检测符合5土壤环境质量标准6(gb15618-1995)中的标准。

试验时间为2004年5月~9月。大眼幼体于5月13日入池,投放密度为270尾/m3。

1.3 饵料的配制

有机饵料的配制。有机养殖需要专门的有机饵料,目前市场上没有现成的有机饵料出售,用于试验的有机饵料为自行研制。成分为有机大豆、有机小麦、有机大米(黑龙江龙奇有机食品开发公司提供)以及天然鱼粉、天然鱼杂碎,粉碎后按一定的比例混合制粒而成。常规养殖的饵料为江苏省连云港市苏兰林饵料有限公司生产。

1.4 *的配制

中药添加剂配方为:大蒜瓣50%,枸杞20%,茯苓20%,黄芪10%。

制作方法:大蒜瓣去皮捣成糜状,枸杞、茯苓、黄芪充分浸泡,制成浆状,与大蒜糜充分混合,拌料2~4h后投喂。

2 试验方法

2.1 试验分组

常规养殖池为1组,有机养殖池为2、3、4、5组。1组按常规管理方式管理,投喂常规饲料;2、3、4、5组投喂专用有机饵料,其中,2组饵料中不添加中药添加剂,3、4、5组饵料中分别添加0.5%、1%、2%的中药添加剂。试验期间各组均

按有机水产养殖方式管理。

2.2 样品的制备

各组在饲喂30天后次取样,60天后次取样,每一处理同时做一平行样。次样各取期幼蟹6只,次样各取幼蟹4只,去掉/骨质0部分,留下心脏、肝脏、性腺等组织块匀浆缓冲液(ph7.5,0.25mol/l蔗糖,0.02

mol/ltris-hcl,0.1mmol/ledta22na溶液冲洗,用洁净吸水纸吸去表面水分,称重,取0.1g组织块,加入组织块9倍体积的匀浆缓冲液冰浴匀浆,3000r/min低温高速离心机离心10~1min,取上清液(2ml)待测。

2.3 检测指标及测定方法

溶菌酶(ul)活力、超氧化物歧化酶(sod活性测定参照南京建成生物研究所生产的试剂盒说明书进行。

3 结果

3.1 中药添加剂对扣蟹组织中超氧化物歧化酶(sod)活性的影响中药添加剂对扣蟹组织中超氧化物歧化酶活性的影响见图1。经过30天和60天处理后,各处理组中sod活性有明显的变化,表现为处理60天组>处理30天组,30

天组中,3组>5组>2组>组>1组;60天组中,3组>4组>2组>5组>组。有机养殖组(2、3、4、5组)比常规养殖组(1组)sod活性明显高,*高的3组为1组的61倍(30天处理组)和619倍(60天处理组),*低的4组为1组的217倍(30天处理组),5组是组的213倍(60天处理组)。未添加*的有机养殖组比常规养殖组高212倍(30天处理组)和211倍(60天处理组)。有机养殖组中,未添加中药添加剂的2组和添加中药添加剂的3、4、5组sod活性比较,其增幅分别是:30天处理组99%、-16%、12.3%;60天处理组,123.7%、26.0%、-25.7%。在同一组中,30天处理组与60天处理组比较,1组增加64.9%、2组增加59.9%、3组增加79.6%、4组增加140.7%、5组增加5.9%。统计分析表明,1组与2、3、4、5组间差异显著(p<0.05),2组与3组间差异显著(p<0.05),2组与4、5组差异不显(p>0.05)。

3.2 中药添加剂对扣蟹组织中溶菌酶(ul)活力的影响

中药添加剂对扣蟹组织中溶菌酶(ul)活力的影响见图2。同一组中,30天处理组与60天处理组比较,1组增加180.4%、2组增加120.0%、3组增加21.6%、4组增加72.1%、5组增加22.3%。30天处理组中,与1组比较,2、3、4、5组分别增加37.5%、213.5%、71.3%、144.3%;与2组比较,3、4、5组分别增加128%、24.6%、77.7%。60天处理组中,与1组比较,2、3、4、5组分别增加7.9%、36.0%、5.2%、6.5%;与2组比较,3、4、5组分别增加26.1%、-2.5%、-1.3%。统计分析表明,30天处理组中,1组与3组、4组、5组差异显著(p<0.05),1组与2组差异不显著(p>0.05);2组与3组差异显著(p<0.05),2组与4组、5组差异不显著(p>0.05)。60天处理组中,3组与其它各组差异显著(p<0.05),1、2、4、5组间差异不显著(p>0.05)。

4 讨论

4.1 sod是生物机体抗氧化酶系统中重要的抗氧化酶之一,作为活性氧自由基剂,在延缓机体衰老及防止生物大分子损伤方面具有极重要的作用。此外,sod还具有、抗病毒等作用,目前已作为防衰老和化妆品成分而应用于人体。已有研究发现,sod活性与生物的水平密切相关。因此,sod可作为机体非特异性指标,来评判刺激剂对机体非特异性力的影响[12~16]。

已有的研究表明,某些维生素、多糖、中药制剂能够增强对虾、罗氏沼虾等甲壳动物的非特异性力,从而提高其抗病力[17~19]。本研究通过筛选出的中药作为添加剂来确定其对扣蟹组织中的sod活性的影响,试验表明在饲料中添加1%中药添加剂,sod活性增加效果*为显著,连续添加30天时,效率*高,到60天时,达到*高值。

4.2 溶菌酶是动物机体许多组织重要的非特异性因子,也是甲壳动物非特异性防御系统的重要组成部分,是吞噬细胞的物质基础。本研究表明,扣蟹在生长发育过程中,体内组织中的溶菌酶活力不断加强,而中药添加剂能够促进体内组织中溶菌酶活力的增加,中药添加剂在饲料中添加量以1%为宜,添加30d效果*为明显。

4.3 已有的研究表明,多糖、维生素等都能影响甲壳动物sod活性和溶菌酶的活力。但其均为化学合成物质,在有机水产养殖中是禁用的。在有机水产养殖过程中,不允许合成的促生长剂、合成诱食剂、合成的抗氧化剂、经化学溶剂提取的饵料等添加于饵料中或以任何方式喂养生物[20]。本研究表明,天然的中药添加剂能促进扣蟹非特异性能力的提高。*来源于天然动植物及矿物,具有资源丰富,价格低廉,方便、功能、无残留及毒副作用小等优点,且含有多种活性因子,具有营养与保健的双重功能,因此,可作为保健防病和添加剂,直接饲喂动物,起到防病促生长作用。中药添加剂符合有机养殖的要求,是进行有机养殖合适的增强剂。

4.4 扣蟹体液内不存在球蛋白,缺乏抗体介导的反应,它的系统具有非特异性性,适当的诱导可提高组织及血液的因子的数量和活性。因此,研究如何选择合适的增强剂或刺激剂来提高扣蟹的抗病能力,必将成为有机水产养殖中扣蟹防治的一个重要方向。某些中药及其制剂能够增强扣蟹的非特异性力,减少的发生,但不是对所有的有效,应该考虑使用的时间、剂量、方法等。本实验结果表明,本研究所筛选的中药添加剂添加1%的饲料量,施用30~60天时能有效地增加扣蟹组织中sod活性和ul活力。但是中药添加剂中有效成分的定量分析及其作用机理还有待进一步研究;是否还有其它更合适中药添加剂配方,有待进一步的探索。

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